cell counting kit-8

描述

 

产品描述：

CCK-8试剂盒的核心成分是一种名为WST-8的水溶性四唑盐。在活细胞线粒体脱氢酶和电子耦合剂（1-甲氧基PMS）的共同作用下，WST-8被还原生成高水溶性的橙黄色甲臜（Formazan）染料。

生成的甲臜染料量与活细胞的数量和活性成正比，因此通过酶标仪在450nm波长下检测吸光度（OD值），即可快速、定量地评估细胞状态。

使用场景：

· 药物研发与筛选：高效评估小分子化合物、多肽、中药提取物等对细胞增殖的抑制或促进作用，用于抗癌药、抗病毒药的初步筛选及功能安全性研究。
· 肿瘤学研究：检测肿瘤细胞的增殖活性，进行肿瘤药敏试验，评估不同治疗方案的效果。
· 基因功能研究：用于目的基因过表达、敲低（RNAi）或敲除后的细胞表型分析，研究特定基因对细胞生长的影响。
· 生物材料与毒性评价：评估纳米材料、医疗器械浸提液、化学试剂等对细胞的毒性作用。
· 基础细胞生物学：常规的细胞增殖测定、细胞因子活性分析、细胞毒性测定等。

标准使用流程

以最常用的96孔板为例，操作流程清晰简单。使用其他规格培养板（如384孔、24孔、6孔板）时，请按培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

第一步：细胞接种与处理
在96孔板中每孔接种100μL细胞悬液。贴壁细胞建议至少1000个/孔，悬浮细胞（如白细胞）建议不少于2500个/孔。放入CO₂培养箱（如37°C，5% CO₂）预培养。

第二步：加入待测物
根据实验设计，向孔中加入不同浓度的药物或其他待测物质，继续培养特定时间（如6、12、24或48小时）。

第三步：加入CCK-8并孵育
每孔直接加入10μL CCK-8溶液。轻轻晃动培养板混匀，放回培养箱孵育1-4小时。孵育时间需通过预实验优化。

第四步：检测吸光度
使用酶标仪，在450nm波长处测定每孔的吸光度（OD值）。若无450nm滤光片，使用430-490nm的滤光片亦可，但450nm灵敏度最高。

第五步：结果计算
通过以下公式计算细胞活力：细胞活力 (%) = [(As – Ab) / (Ac – Ab)] × 100。
· As：实验孔（细胞+CCK-8+药物）的OD值。
· Ab：空白孔（培养基+CCK-8，无细胞）的OD值。
· Ac：对照孔（细胞+CCK-8，无药物）的OD值。

储存方法：

· 常用保存：0-5°C（冷藏）避光保存，有效期可达1年。
· 长期保存：-20°C避光冷冻保存，有效期可延长至2年。

注意事项：

1、试剂正常颜色为粉红色，若颜色发生明显改变，可能意味着质量下降。经常使用时建议冷藏保存，避免反复冻融，否则可能增加背景值。
2、均匀性与混匀：接种细胞和加入试剂时，确保混匀，避免孔间差异。加入CCK-8后，可轻轻晃动培养板使混合均匀。
3、避免气泡：加样时避免在孔中产生气泡，读数前检查并去除气泡，否则会严重干扰OD值读数。
4、防止蒸发：对于长期培养，可将96孔板最外一圈孔加入PBS或培养基，以减少“边缘效应”导致的蒸发影响。